基于 spri(solid phase reversible immobilization ) 技术,在磁珠法反应体系中,核酸分子(dna & rna)会由线性压缩成球状, dna 在一定浓度的 peg 存在条件下,nacl 或 mgcl2 促进条件下,dna 分子构象会发生急剧变化,会暴露出磷酸骨架上大量的带负电荷的磷酸基团,与表面带负电荷的羧基-cooh 磁珠结合。目前认为这种负负电荷间的作用是由于带正电荷的盐离子的作用(如 na+)。带负电磷酸基团借由解离的盐离子(如 na+)与羧基形成「阴离子-阳离子-阴离子」的盐桥结构,使 dna 被特异性吸附到羧基磁珠表面。而当反应缓冲液被弃除后,加入水性分子,会快速充分水化核酸分子,解除三者之间的离子相互作用,使吸附到磁珠上的核酸分子被纯化出来。利用磁珠的磁性,可通过外加磁场进行收集。
受益于高通量测序技术的发展,磁珠也凭借其高通量,适用于自动化的特点备受推崇,广泛用于 ngs 文库构建中的 dna 提取纯化及双轮分选(片筛)。
dna 提取纯化的目的在于去除不想要的片段、回收需要的片段。由于磁珠**吸附大片段,因而可通过一定比例的磁珠吸附特定大小以上的片段,丢弃上清(去除非目标片段)后将磁珠吸附的 dna 洗脱回收。
dna 双轮分选(片筛)目的在于从片段中选择特定区域的 dna 片段大小。由于磁珠**吸附大片段,因而需通过两轮磁珠操作进行分选。
兔牙生物科技研发的 bunnymagtm 磁珠分选纯化试剂盒中的磁珠,与市面上大部分的磁珠类似,
磁珠结构(分为 3 层):
• 较内层的**是 polystyrene,ps
• *二层包裹磁性物质——四氧化三铁(fe3o4)
• 较外层表面是羧基(-cooh)修饰的高分子材料
磁珠体系主要包括磁珠、聚乙二醇(peg)、盐离子(nacl)
兔牙科技 bunnymagtm 磁珠的优势:
(1)样本需求量低:微量的材料即可提到高浓度的核酸;
(2)操作简单快速:整个操作流程基本分为五步(裂解、结合、洗涤、干燥、洗脱),全程*离心操作,大多可在 30~60 分钟内完成;
(3)质量稳定可靠:游离的磁珠与核酸的结合量较大,特异性的结合使得核酸纯度较高,且可通过控制磁珠表面基团来调节核酸回收量;
(4)全自动化操作:采用核酸提取仪可实现自动化、高通量操作,可实现几十甚至几百个样品的提取;
(5)安全无毒无害:试剂不含酚等有毒化学试剂,完全符合现代化环保理念。
南京兔牙生物科技有限公司专注于去人源宿主试剂盒,游离dna保存管,游离dna提取,ffpe提取,qubit定量,病原微生物提取等
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