小分子类物质包含多肽、天然小分子、化学合成小分子等一系列的物质,被广泛用于medicine等各个领域。以往小分子的定量检测主要通过气相和液相色谱完成,存在周期长,检测仪器价格昂贵等多方面的不足。那么immune检测技术可以用于定量检测小分子吗?
免1疫检测*盒的技术基础就是*原和*1体的特异性结合,小分子特异性*1体的制备即是小分子immune检测*盒制备的关键之处。小分子由于分子量小,结构简单,在免1疫学上划归为半*原(hapten),即只有immune反应性而没有immune原性的一类物质,不能直接刺激机体产生antibody但是却拥有和antibody结合的特性。随着*1体制备技术的发展,小分子特异性*1体的制备技术显得更为多元化
传统小分子特异性antibody制备技术
为解决小分子这类半*原物质无法刺激宿主动物产生antibody的特性,必须将半*原回复完全*原的特性。解决这个问题可以通过将小分子和对宿主动物immune原性很强的物质:如ova、bsa、klh等偶联,将其制备成完全*原,通过immune宿主动物,便能促使宿主动物产生针对小分子的特异性antibody,这类antibody通过*原特异性的筛选便能获取目的antibody。目前,通过此项技术能解决绝大多数小分子特异性antibody的制备,湖北*盒,但是也可能由于小分子的结构特异,偶联物和偶联方式的选取、偶联率的差异以及immune技术有待发展等多方面的因素使其特异性antibody的制备存在困难。
选择素elisa*盒的实验原理
选择素elisa*盒是一类异亲型结合、ca2 依赖的细胞粘着分子,能与特异糖基识别并结合。主要参与白细胞与血管内皮细胞之间的识别与粘着。
实验原理:
将目标包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入品或标本,其中的目标连接于固相载体上的结合,然后加入微生*的目标,将未结合的生物素洗净后,加入hrp标记和亲和素,再次*洗涤后加入tmb底物显色。tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,酵母核酸纯化*盒,并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶1标仪在450nm波长下测定吸光度(o.d.值),*组cna纯化*,计算样品浓度。
精密度:精密度用样品测定值的变异系数cv表示。cv(%)=sd/mean×100
批内差:取同批次选择素elisa*盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20次,分别计算不同浓度样本的平均值及sd值。
批间差:选取3个不同批次的*盒分别对低、中、高值定值样本定量测定,每个样本使用同一*盒重复测定8次,分别计算不同浓度样本的平均值及sd值。
批内差: cvlt;10% inter-批间差: cvlt;13%
经测定,*盒在x期内按推荐温度保存,其活性率小于5%。为减小外部因素对*盒前后检测值的影响,实验室的条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可人为误差。
选择素elisa*盒识别的配体都是一些寡糖基团,迄今为止发现的配体都是一些具有唾液酸化路易斯寡糖(s-le,siaglyl-lewis)或类似结构的分子。一种寡糖基团可以存在多种糖蛋白和糖脂分子上,并分布于多种细胞表面,因此选择素分子配体在体内分布较为广泛。
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