细胞-南京英瀚斯生物科技-细胞增殖
细胞培养中常见的污染及解决方法
原生动物污染
原生动物污染后，细胞，细胞培养基变得轻微浑浊。在显微镜下，大量的小点来回移动。虽然此时细胞仍能生长，但繁殖速度减慢，细胞生长状态不好，边缘不清，变得不透明。原生动物与细胞形成共生关系。同时，原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍，但以细胞为主，因为原生动物的数量相对较少，因而对细胞的正常生长没有影响，只有当它们达到一定数量时，才终爆发成为循环。
解决方法：原生动物污染的原因有很多，如液体消毒问题、操作问题、环境问题等，如果细胞足够，果断丢弃被污染的细胞和复苏细胞。如果要保留，需要购买使用相关的灭菌*。
选择实验外包公司需要注意哪些事项？
技术支持
尽量有专门的技术负责对接项目，或者有技术服务群。随时沟通项目问题，定期汇报实验进展。这样能把控实验进度，结果数据有疑问也可以交流，不要实验做完就没人管了。
实验数据
明确提供实验原始数据、原始图片，并有保密协议不外传数据和客户的信息。确保实验结果的完整性、唯独性、真实性。这也是找实验外包很关心的原则。另外结果尽量有实验报告形式，包含所用材料、实验步骤和结果统计分析，细胞增殖，方便写文章时直接使用。另外实验都是有不确定性的，如果外包公司能保证一定能做出预期的结果，那多半是不靠谱的。做实验不怕出问题，*的外包公司会负责到底，有问题反馈再处理就好。
三、自噬过程进行观察和检测
1、观察自噬体的形成
由于自噬体属于亚细胞结构，普通光镜下看不到，因此，直接观察自噬体需在透射电镜下。phagophore的特征为:新月状或杯状，双层或多层膜，有包绕胞浆成分的趋势。自噬体(av1 )的特征为:双层或多层膜的液泡状结构，内含胞浆成分，如线粒体、内质网、核糖体等。自噬溶酶体(av2 )的特征为:单层膜，胞浆成分己降解。( autophagic vacuolo av )
2、在荧光显微镜下采用gfp-lc3融合蛋 白来示踪自噬形成由于电镜耗时长，不利于监测(monitoring) 自噬形*们利用lc3在自噬形成过程中发生聚集的现象开发出了此技术。无自噬时，gfp-lc3融合蛋 白弥散在胞浆中;自噬形成时，gfp-lc3融合蛋白转 位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。
3、利用western blot检测lc3-ii/比值的变化以评价自噬形成自噬形成时，胞浆型lc3 (即 lc3-i)会酶解掉一小段多肽，转变为(自噬体)膜型(即lc3-id，细胞培养，因此，细胞生物学，lc3-ii/比值 的大小可估计自噬水平的高低。(注意: lc3对lc3-ii有更高的亲和力，会造成假阳性。方法2和3需结合使用，同时需考虑溶酶体活性的影响。)
4、mdc (monodansylcad*erine ，单丹磺酰尸胺)染色:包括自噬体，所有酸性液泡都被染色，故属于非特异性的。
5、celltrackertm green染色:主要用于双染色，但其能染所有的液泡，故也属于非特异性的。
细胞-南京英瀚斯生物科技-细胞增殖由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司是从事“组织病理,细胞生物,分子生物学平台,动物模型医学科研外包服务”的企业，公司秉承“诚信经营，用心服务”的理念，为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询！联系人：戴经理。
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三、自噬过程进行观察和检测
1、观察自噬体的形成
由于自噬体属于亚细胞结构，普通光镜下看不到，因此，直接观察自噬体需在透射电镜下。phagophore的特征为:新月状或杯状，双层或多层膜，有包绕胞浆成分的趋势。自噬体(av1 )的特征为:双层或多层膜的液泡状结构，内含胞浆成分，如线粒体、内质网、核糖体等。自噬溶酶体(av2 )的特征为:单层膜，胞浆成分己降解。( autophagic vacuolo av )
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3、利用western blot检测lc3-ii/比值的变化以评价自噬形成自噬形成时，胞浆型lc3 (即 lc3-i)会酶解掉一小段多肽，转变为(自噬体)膜型(即lc3-id，细胞培养，因此，细胞生物学，lc3-ii/比值 的大小可估计自噬水平的高低。(注意: lc3对lc3-ii有更高的亲和力，会造成假阳性。方法2和3需结合使用，同时需考虑溶酶体活性的影响。)
4、mdc (monodansylcad*erine ，单丹磺酰尸胺)染色:包括自噬体，所有酸性液泡都被染色，故属于非特异性的。
5、celltrackertm green染色:主要用于双染色，但其能染所有的液泡，故也属于非特异性的。
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