转录组重测序
转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有mrna的总和。转录组研究是*功能及*结构等研究的基础,通过新一代高通量测序,能够快速的获得某一物种特定组织或在某一状态下的几乎所有转录本序列信息,已广泛应用于临床诊断、基础研究和研发等领域。
转录组resequencing针对的是有参考*组的物种。用新一代高通量测序技术对某物种的特定组织或细胞进行转录组测序,与参考*组比较,可以得到*表达差异、可变剪接、融合*等遗传调控信息。
腺病毒包装原理介绍
腺病毒是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒,由252个 壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。衣壳里是线状双链dna分子,两端各有长约100bp的反向重复序列。*腺病毒 已知有33种,分别命名为ad1-ad33,研究详细得是ad2.
腺病毒是一种无包膜的球型结构的病毒,遗传物质为线型 双股dna形式。腺病毒的特点:(1)gan染范围广对人致病性低;(2)对增殖和非增殖细胞均具有gan染性;(3)能有效进行增殖;( 4)病毒滴度高;(5)不整合到染色体中,pcr,无插入致突变性;(6)外源*装载容量大。由于腺病毒的这些特点使其广泛地应用于体 外*转导、体内接种yi苗、和*zhi疗等各个领域。
实验方法
1.获得目的*序列;
2.构建病毒表达载体质粒;
3.表达载体质粒和包装质粒重组;
4.gan染hek293,dna检测,包装出病毒;
5.病毒扩增、浓缩;
6.滴度测定。
高l效液相色谱法检验方法
高l效液相色谱法是一种现代液体色谱法,实时荧光定量pcr,其基本方法是将具一定*性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相,用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱,注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后,各成分先后进入检测器,用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理,得到测定结果。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相,本法具有分离性能高,分析速度快的特点。
高l效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定,特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反.应,方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有硅胶用于正相色谱;化学键合固定相,根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱,pcr,其中常用的是十八烷基硅l烷(又称ods)键合硅胶,可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料,用于离子交换色谱,是有一定孔径的大孔填料,用于排阻色谱。
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